Принцип методу. Метод, заснований на видобуванні кельтана з біологічних об'єктів гексаном: очищенню екстракту з калу через шар сернокислого натрію, а з м'язів і внутрішніх органів - через шар силикагеля ЛС (для тонкослойной хроматографії) з подальшою елюацией сумішшю бензолу з гексаном; концентрації екстракту і розділенні його методом хроматографії в тонкому шарі, вияві розчином аммиаката срібла в ацетоне з подальшим ультрафіолетовим опромінюванням. Кількісне визначення проводиться шляхом вимірювання площ плям проб і стандартних розчинів.

Визначення в плазмі крові. У центрифужную пробиркус 1-2 краплинами гепарина беруть 6-8 мл крові і центрифугируют 10-15 мін при 8 тис. об/міна 3-5 мл отриманих плазми підкисляють 0,1 N розчином соляної кислоти до рН 5-6, перемішують з 2-3 мл гексана протягом 3-5 мін (уникати утворення емульсії). Гексановий шар відстоюють і отсасивают піпеткою з шприцом. Екстракцію повторюють другий раз, об'єднаний екстракт упаривают в струмі повітря до малого об'єму.

Визначення м'яса, внутрішні органов.10 мг м'яса, 5 г печінки, бруньок ретельно подрібнюють ножицями, розтирають в ступка з кварцовим піском, заливають дистильованою водою, підкисленою 0,1 N розчином соляної кислоти до рН 5-6 (1:10). Суміш витримують 8-12 годин при кімнатній температурі, періодично струшуючи. У ділильній воронці суміш ретельно перемішують 3-5 хвилин (не струшуючи). Гексановий шар відділяють, екстракцію повторюють другий раз. Після цього об'єднаний екстракт фільтрують через воронку, в нижній частині якій укладена вата (не більше за 50 мг), насипаний шар 3-4 см силикагеля ЛС (для тонкослойной хроматографії).

Перед вживанням воронку промивають 20 мл гексана. З воронки кельтан елюируют сумішшю бензолу з гексаном (3:1) два рази порціями по 20 мл. Елюат упаривают в струмі повітря до малого об'єму або досуха.

Визначення в кале.0,1 г калу заливають 15-20 мл гексана, інтенсивно 1-2 хвилини струшують і залишають на 30 хвилин при періодичному помішуванні. Екстракт фільтрують через паперовий складчастий фільтр, змочений гексаном. Після цього пропускають через воронку, в нижній частині якій вата (не більше за 50 мг), зверху насипаний шар 2-3 безводного сернокислого натрію. Воронку перед вживанням промивають 20 мл гексана. Екстракт упаривают в струмі повітря до малого об'єму.

У упаренном до малого об'єму екстракті з плазми крові, мишечной тканини, внутрішніх органів, калу кельтан визначають методом хроматографії в тонкому шарі. Для цієї плями випробуваної проби, отриманої на хроматографической пластинці порівнюють зі стандартним розчином препарата (10 мг кельтана хч розчиняють в 100 мл гексана). Як жвавий розчинник використовують суміш гексана з ацетоном (1:6). Реактив для проведення плям пестициду готують в день вживання по пропису: 0,1 г азотнокислого срібла розчиняють в 1 мл дистильованих води і доводять об'єм розчину до 100 мл ацетоном. До готового реактиву додають 2 мл розчини аміаку (уд вага 0,9). Після вияву пластинки піддають дії ультрафіолетових променів протягом 10-15 хвилин. Rf кельтана при гексано-ацетоновому жвавому розчиннику рівний 0,4.

Контрольні питання:

1 Визначення кельта в плазмі крові і в калі?

2 Визначення кельта в м'ясі і внутрішніх органах?